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加米霉素注射液在猪体内的休药期验证试验
冯言言 1，郑 莉 1，马庆祝 1，田 伟 1，常 雪 1，李龙飞 1，郭晶晶 1，孔 梅 1 *，黄显会 2
（1.齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250100；2.华南农业大学兽医学院，广东 广州 510641）
加米霉素为15元环的半合成氮杂内酯类抗生素，属于大环内酯类抗生素，主要通过与细菌核糖体50S亚基结合，阻止多肽链延长，抑制细菌蛋白质的合成。体外试验数据表明，加米霉素以抑菌方式对引起猪和牛呼吸系统疾病常见病原菌如胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌等起作用。加米霉素内酯环的7a位为烷基化氮，在生理pH条件下能快速吸收，并在靶组织肺中维持长时间的作用。
依据农业农村部于2020年11月19日制定的农业农村部公告第362号《兽药比对试验目录（第三批）》要求，加米霉素注射液属于比对产品，需开展在猪体内的休药期验证试验。本试验进行了加米霉素注射液在猪体内的休药期验证试验，为确定休药期提供依据。
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试验材料
1.1 试验动物
11头健康去势三元杂交猪，体重范围为59.60±3.15 kg，试验猪通过耳标编号进行标识，采用自然光照，全价饲料给药，自由饮水。试验开始前，适应环境观察7 d，动物确认健康无误后用于试验。
1.2 试验药物
受试药物：加米霉素注射液，规格：100 mL∶15 g，批号：301203002，由齐鲁动物保健品有限公司生产。用法用量：肌内注射，一次量，每1 kg体重6 mg（相当于每25 kg体重注射1 mL），每个注射部位的给药体积不超过5 mL。
对照品：加米霉素，含量：98.1%，批号：03481003GS；加米霉素内标，含量：95.0%，批号：21-GRS-148-6。
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试验方法
2.1 试验分组
将11头试验猪分为两组，10头为加米霉素注射液给药组，1头为空白对照组，具体分组及处理见下表1。
2.2 样品采集
加米霉素注射液给药组：在停止给药后第16天进行采样。
空白对照组：在试验前采集样品。
参照农业农村部公告第326号《兽药残留消除试验指导原则》中的要求，采集每头猪的肌肉、肝脏、肾脏、皮脂和注射部位肌肉，具体组织样品采集量见表2。
样品采集后不得进行任何洗涤或处理，所有样品立即均匀分成若干份包装，并做好标记，存于-20℃冰箱中。
2.3 样品测定
样品使用经确定的方法进行提取、净化，并使用经验证的液相色谱串联质谱法进行检测。在测定样品中的药物浓度时使用随行标准曲线和质控样品，保证所建立方法在实际样品检测中的可靠性。
按下式进行组织中加米霉素含量的测定：
式中：C——供试样中加米霉素的含量，单位：?g/kg；CD4——供试样品中加米霉素内标的含量，单位：?g/kg；y——供试样品处理后试样溶液中加米霉素色谱峰面积与加米霉素D4色谱峰面积比值；a——标准曲线回归方程中斜率；
b——标准曲线回归方程中截距；
n——样品提取过程中稀释倍数。
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试验结果
加米霉素注射液在猪各组织中的含量测定结果见表3，加米霉素在猪各组织中的最高残留限量（MRLs）见表4。
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结论
休药期验证试验结果表明，加米霉素注射液按照推荐剂量6 mg/kg 体重单次颈部肌内注射给药后第16天，猪只各组织中的药物浓度均低于农业农村部规定的最高残留限量，因此，可将加米霉素注射液在猪体内的休药期定为16 d。
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