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前言
近年来，随着集约化、规模化养殖的迅速发展，动物免疫力下降、疾病频发、用药频繁、畜产品质量降低等问题日渐凸显，逐渐成为了消费者关注的焦点。因此，在动物饲粮中添加绿色添加剂来提高动物生长性能、增强免疫功能、调节肠道健康、改善肉品质成为目前的研究热点。酶制剂、益生菌是动物生产中研究较为广泛的饲料添加剂，具有提高动物生长性能、增强免疫力、改善肠道健康、提高肉品质等功能。Zhao等和Hong等研究表明，在生长猪饲粮中添加复合酶可显著提高平均日增重（ADG）、干物质和氮的表观消化率，显著降低饲料成本。Yi等研究表明，在饲粮中添加复合酶（淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶）可调节肠道菌群平衡和肠道短链脂肪酸（SCFAs）水平。复合益生菌可显著提高猪只生长性能，降低血清白介素6（IL-6）、干扰素γ（IFN-γ）及排泄物中NH和HS的浓度，调节SCFAs水平。目前有关酶制剂、益生菌等单一物质在动物生产中的应用较多，酶制剂、益生菌联合应用的效果及机制有待深入研究。基于此，本试验旨在研究饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪生长性能、肉品质、抗氧化性能及肠道SCFAs的影响，以期为益生菌、酶制剂在养猪生产中的联合应用提供科学依据。
01材料与方法
1.1试验材料
复合益生菌由本实验室自主培养制备，含植物乳杆菌、银杏乳酸菌和酿酒酵母，每种菌添加量均为0.5×109CFU/kg。酶制剂由广东溢多利生物科技股份有限公司提供，含有蛋白酶（活力为36000U/g）和淀粉酶（中温α淀粉酶活力为1000U/g、普鲁兰酶活力为100U/g、糖化酶活力为8000U/g。
1.2试验设计与饲粮
选取日龄和体重相近（约45kg）的健康生长猪（约克夏×荣昌）40头，公母各半（公猪为阉公猪），随机分为对照组和试验组，每个组4个重复，每个重复5头猪。对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂基础饲粮+0.1g/kg酶制剂+1.5×109CFU/kg复合益生菌。试验预试期3d，正试期63d。试验期间自由采食与饮水，免疫和饲养管理按常规方法进行。每天监测猪群的健康状况，记录猪的死淘情况。基础饲粮为玉米-豆粕型无抗基础饲粮，参照《猪营养需要量》（GB/T39235—2020）配制，饲粮组成及营养成分见表1。
1.3样品采集及指标测定
1.3.1生长性能
试验期间，每天记录各重复采食量，计算平均日采食量（ADFI）；在正式试验开始第1天和第63天早晨空腹8h以上后称重，计算ADG和耗料增重比（F/G）。计算公式：
ADG（kg/d）=总增重/试验天数
ADFI（kg/d）=饲粮消耗量/试验天数
F/G=累计饲料消耗量/（末重?初重）
1.3.2肉品质
在试验第63天早晨，每个重复选取1头接近平均体重的猪，空腹8h以上后屠宰，取左侧胴体背最长肌，参照《猪肉品质测定技术规程》（NY/T821—2019）进行肉品质检测。
1.3.3血清免疫指标
在试验第63天早晨，每个重复选取l头接近平均体重的猪，采集颈静脉血10mL，置于促凝采血管中，静置2~3h后4℃、3000r/min离心10min，取上清液分装到1.5mL离心管中，并于-20℃保存备用。按照南京建成科技有限公司试剂盒说明书测定猪血清中免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）和细胞因子（IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10）的含量，测定仪器为酶标仪（SynergyH1，GeneCompanyLimited）。
1.3.4肌肉抗氧化指标
屠宰后取左侧胴体背最长肌，按照北京索莱宝科技有限公司试剂盒说明书检测肌肉丙二醛（MDA）、还原性谷胱甘肽（GSH）含量及总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）等指标。测定仪器为酶标仪（SynergyH1，GeneCompanyLimited）。
1.3.5盲肠内容物
SCFAs屠宰后迅速结扎盲肠两端，取盲肠中段内容物分装于数个无菌EP管中，液氮速冻后置于-80℃冰箱中保存待测。采用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）测定盲肠内容物中SCFAs含量。
1.4统计分析
试验数据采用SPSS26.0统计软件进行分析，分析方法为独立样本t检验。结果采用平均值±标准误表示，其中，P>0.05为差异不显著，P<0.05为差异显著，0.05≤P<0.10作为趋势性判断标准。
02试验结果
2.1饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪生长性能的影响
由表2可知，与对照组相比，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂有提高猪只末重（P=0.09）、降低ADFI（P=0.09）和F/G（P=0.08）的趋势，对ADG无显著影响（P>0.05）。
2.2饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪肉品质的影响
由表3可知，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可提高生长育肥猪屠宰后肌肉pH1、降低滴水损失（P<0.05），对其他肉品质指标没有影响（P>0.05）。
2.3饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪血液免疫指标的影响
由表4可知，与对照组相比，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可提高生长育肥猪血清中IgA、IgG以及细胞因子IL-2、IL-10水平（P<0.05），添加复合益生菌和酶制剂对血清中IgM、IL-1β和IL-6水平无影响（P>0.05）。
2.4饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪肌肉抗氧化性能的影响
由表5可知，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪肌肉抗氧化性能均无影响（P>0.05）。
2.5饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪盲肠SCFAs的影响
由表6可知，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪盲肠SCFAs、含量无影响（P>0.05）
03讨论
3.1饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪生长性能的影响
研究表明，动物饲粮中添加酶制剂和益生菌可提高其生长性能。Min等研究发现，在生长育肥猪饲粮中添加0.01%蛋白酶可显著提高ADG、显著降低F/G。Zhang等研究表明，在断奶仔猪饲粮中添加复合益生菌（枯草芽孢杆菌、粪肠球菌）可显著提高ADG、ADFI，显著降低F/G。此外，在生长猪饲粮中添加复合酶（木聚糖酶、β-葡聚糖酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶和植酸酶）可显著提高钙和磷的表观回肠消化率以及粗蛋白质、钙和磷的表观总消化率，从而提高其生长性能。本研究表明，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂有提高猪只末重、降低ADFI和F/G的趋势，说明饲粮中添加复合益生菌和酶制剂具有提高生长育肥猪生长性能的作用。这可能是因为外源益生菌在动物肠道定植后，可增强动物肠道微生物代谢；酶制剂可补充动物体内含量不足和一些动物自身不能合成的酶。由此可见，在饲粮中添加益生菌和酶制剂能促进营养物质的消化吸收，从而提高动物的饲料转化3.2饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪肉品质的影响肉品质是决定猪肉价值的重要因素。pH可通过调控蛋白质活性影响肉的颜色、持水力。在本试验中，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可显著提高猪肉pH，但对肉色L*、肉色a*、肉色b*没有显著影响。持水力又称系水力，对肉的嫩度、颜色和营养组成都有影响。本试验表明，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可显著降低肌肉滴水损失，说明饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可改善猪肉持水力，进而改善猪肉品质。Suo等发现，在断奶仔猪饲粮中添加植物乳杆菌ZJ316可改善肌肉pH、硬度、黏性、咀嚼性和恢复力。Kim等表明在育肥猪饲粮中添加复合益生菌可提高肉色、降低滴水损失。Yang等也表明，育肥猪饲喂复合益生菌（枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和罗伊氏乳杆菌）固态发酵饲料可显著降低猪肉的剪切力和滴水损失。综合分析表明，在饲粮中添加益生菌和酶制剂可改善猪肉品质。
3.3饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪血液免疫指标的影响
血清免疫指标可反映动物机体的免疫水平、代谢情况及健康状况。Long等研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加复合酶（淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶）可显著提高血清IgA、IgG和IgM浓度。Taranu等研究表明，断奶仔猪饲喂酿酒酵母发酵菜籽粕可显著降低血清IL-1β、IL-6浓度，显著增加IFN-γ浓度。Cao等研究表明，在断奶仔猪饲粮中添加复合益生菌（丁酸梭菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌）可显著降低血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β浓度。本试验也表明与对照组相比，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可显著提高血清IgA、IgG、IL-2和IL-10水平。免疫球蛋白具有抗菌、抗病毒、抗感染等作用，白细胞介素是参与机体炎症反应的重要因子，血液免疫球蛋白、白细胞介素浓度可以反映机体的免疫水平和健康状况。分析可见，饲粮中添加复合益生菌与酶制剂可通过提高血液免疫球蛋白、白细胞介素的浓度增强动物的血液免疫功能，从而保证机体健康。
3.4饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪肌肉抗氧化性能的影响T-AOC、SOD、GSH和MDA都是机体抗氧化系统中的重要指标。T-AOC反映了机体内各种抗氧化分子的总体水平及机体的健康状况。SOD是一种以超氧化物自由基为底物的重要抗氧化酶。GSH是反映机体所处氧化还原状态的重要指标。MDA是脂质氧化的终产物，可反映机体内脂质过氧化程度及细胞损伤程度。Han等研究发现，在饲粮中添加复合酶（真菌α-淀粉酶、酸性蛋白酶、木聚糖酶、β-甘露糖酶、葡萄糖氧化酶、酸性纤维素酶和半乳糖苷酶）可显著提高仔猪肝脏和血清中GSH-Px浓度，显著降低MDA浓度。Wang等研究表明，饲粮中添加益生菌（植物乳杆菌B90、酿酒酵母）和益生元（木糖、木三糖和木四糖）可提高断奶仔猪结肠和血浆过氧化氢酶（CAT）、GSH-Px、SOD水平，降低结肠和血浆MDA、过氧化氢水平。Cheng等研究表明，在饲粮中添加益生菌（丁酸梭菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌）和益生元（酵母细胞壁、低聚木糖）可显著提高猪只背最长肌SOD活性、显著降低臀部肌肉MDA活性。Li等研究结果表明，饲粮中添加益生菌可显著降低断奶仔猪脾脏、肝脏和空肠黏膜的MDA含量，显著提高肝脏和回肠黏膜的T-AOC。本试验结果表明，饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪抗氧化性能无显著影响。由T-AOC、MDA、GSH等抗氧化分子组成的非酶类抗氧化系统和由GSH-Px、SOD、CAT等氧化还原酶组成的酶类抗氧化系统共同调控机体的抗氧化性能。因此，饲粮中添加酶制剂、益生菌可通过调节MDA含量、T-AOC和SOD、CAT等酶活性调控机体的抗氧化性能。
3.5饲粮中添加复合益生菌和酶制剂对生长育肥猪盲肠SCFAs的影响
SCFAs是肠道微生物发酵利用食物中不可消化的碳水化合物的重要产物，主要包括乙酸、丙酸、丁酸等由1~6个碳原子组成的有机脂肪酸，具有调节肠道菌群平衡、增强肠道屏障功能、参与脂质代谢、提高免疫力等生物学功能。Chlebicz-Wójcik等研究发现，饲粮中添加菊粉和益生菌（酿酒酵母、乳酸菌）可改变猪肠道SCFAs的组成。Li等研究表明，饲粮中添加复合酶（淀粉酶、蛋白酶和木聚糖酶）可显著提高仔猪盲肠和结肠乙酸、丙酸及总SCFAs含量。Mair等研究也表明，饲粮中添加益生菌（肠球菌、乳酸菌和双歧杆菌）可显著增加结肠乙酸含量。本试验中，生长育肥猪饲粮中添加复合益生菌和酶制剂可增加盲肠丁酸含量，但差异不显著。这可能与复合益生菌和酶制剂组成或添加量有关。Wang等研究发现，在生长猪饲粮中添加不同含量复合益生菌（地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母）对肠道SCFAs的影响不同，随着日粮中复合益生菌含量的增加，乙酸盐、丁酸盐和总SCFAs浓度呈线性增加，说明复合益生菌对肠道SCFAs的影响与益生菌的添加量有关。
04结论
本试验结果表明，生长育肥猪饲粮中添加0.1g/kg酶制剂和1.5×109CFU/kg复合益生菌可提高其生长性能和免疫水平，改善肉品质。
作者:冷来福，包世利，邱小宇，王敬，齐仁立，王琪
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